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Western Blotting und Immunodetektion
Während die Protein-Gelelektrophorese nur die Bestimmung der Molekulargewichte von Proteinen erlaubt, die sich in einer Probe befinden, läßt sich mittels Immunodetektion feststellen, ob sich ein bestimmtes Protein in der Probe befindet. Dazu werden nach der Elektrophorese die Proteine per Western Blotting vom Gel auf eine Membran transferiert, wo sie mit spezifischen Antikörpern reagieren können.
Die Methode ist weitverbreitet, z.B. für den diagnostischen Nachweis von HIV und BSE (Rinderwahnsinn) und ermöglicht eine praktische Einführung in immunologische Fragestellungen.
Mit dem Schüler-Kit für 8 Arbeitsplätze werden Muskelproben, die mit dem Schüler-Kit "Gelelektrophorese von Proteinen" aufgetrennt wurden, entweder per Elektrotransfer mit einer Tankblotkammer oder kapillar mit einem Stapel Papierhandtücher auf eine Nitrocellulosemembran übertragen. Im nachfolgenden Immunodetektions-Schritt wird Anti-Myosin-Antikörper spezifisch an die Myosinbande des Blots gebunden und mit Farbstoffen sichtbar gemacht.
Zeitbedarf: Probenaufbereitung, Elektrophorese, Western Blotting, Immunodetektion: je 1 Laborstunde pro Arbeitsschritt. Der Versuch kann nach den einzelnen Arbeitsschritten unterbrochen werden.
Der Kit enthält folgende Komponenten:
• lyophilisierte primäre Antikörper (Anti-Myosin)
• lyophilisierte sekundäre Antikörper (mit Meerrettich-Peroxidase konjugiert)
• zwei Meerrettich-Peroxidase-Nachweisreagenzien
• Tris-Glycine • fettfreier Trockenmilch-Blocker
• Röhrchen • Nitrocellulosemembran
• Puffer und Tween • Blottingpapier
| Artikel-Nr. | Artikelbezeichnung |
|---|---|
| 35019.15 | Western Blotting und Immunodetektion, Schüler-Kit |
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